無內毒素快速質粒中量提取試劑盒

RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。

注意事項：

1. 質粒拷貝數: 純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的DNA Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.

2. 轉化菌: 若為-70^oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。

3. 切勿直接取凍存的菌進行培養。

操作簡明步驟：

1. 取50 µL新鮮的菌液接種到15-50 mL （勿超過 50 mL）的LB培養基（含適量抗生素），37^oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。

2. 加入2.5 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。

3. 加入2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。

4. 加入1 mL Buffer N3， 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。

5. 將裂解液轉移至高速離心管，室溫下在12,000 x g 離心10分鐘。

6. 轉移上清液5 mL，向裂解液中加入1倍體積的Buffer RET （即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET）,及3 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混勻，需馬上離心過DNA柱。

7. 立即轉移6 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下5,000 x g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。

8. 可選：向離心柱中加入5 mL Buffer KB，室溫下5,000 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。

9. 向離心柱中加入5 mL 70% 乙醇，室溫下5,000 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。

10. 將離心柱放回高速離心機中，室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘，以*去除殘留的乙醇。

11. 將離心柱轉至一個新的15 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入1 mL 的Endofree Elution Buffer, 室溫放置1分鐘，5,000 x g 離心5分鐘，以洗脫質粒DNA。

12. 將15 mL離心管中的洗脫液上柱再放置洗脫1分鐘，5,000 x g 離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。

操作流程：